摘要:免疫球蛋白G（Immunoglobulin G，IgG）作为一种十分重要的生物药物，已被广泛应用于多种医学诊断和治疗。为构建高效表达重组抗体的哺乳动物生产菌株，运用可以灵活检测抗体分泌运输的表达细胞株，从而充分理解抗体的折叠、转运及分泌尤为重要。作者在哺乳动物细胞株（HEK 293）中构建了一个稳定表达绿色荧光蛋白（GFP）融合型抗体E-F-HyHEL10的表达系统，可通过流式细胞术检测抗体的分泌运输。此哺乳动物细胞表达系统具有良好的抗体表达和分泌水平，且稳定维持了抗体的功能活性。使用布雷菲德菌素A（brefeldin A）和放线菌酮处理细胞后，来自胞内E-F-HyHEL10的GFP荧光信号与抗体分泌水平呈正相关。结果表明，本研究中构建的抗体表达系统可实现抗体表达、累积和分泌水平的灵活准确监测，未来可应用于哺乳动物细胞中抗体分泌相关因子的筛选。

摘要:作者采用了4种不同的厌氧污泥作为木薯乙醇废液处理的接种污泥，在高温55 ℃条件下进行批式实验，并评价了4种不同接种污泥高温厌氧处理木薯乙醇废液的发酵特性。结果表明：高温絮状污泥组、中温絮状污泥组、中温复配污泥组对SCOD的降解率分别为72.1%、72.2%和47.5%，沼气产率分别为188.8、182、109 mL/gTCODadded；而中温颗粒污泥组对SCOD的降解率较低，仅为17.8%，沼气产率为53.7 mL/gTCODadded，这是由于整个发酵过程中VFA浓度较高，抑制了产甲烷菌群对有机物质的转化。中温复配污泥组在第9天时的纤维素酶活性和半纤维素酶活性最大，分别为48.2 U和51.3 U，中温颗粒污泥组酶活力表现较差，在第3天和第5天达到最大值，分别为5.5 U和9.8 U。高温絮状污泥组和中温絮状污泥组的半纤维素酶和纤维素酶活性在第5天时达到最大，分别为10.6、18.7 U和24.6、28.7 U。经过15 d的厌氧发酵，中温复配污泥组粗纤维降解率最大，为41.5%，而其他三种污泥体系粗纤维降解能力一般，其中高温污泥组、中温颗粒污泥组和中温絮状污泥组对粗纤维降解率分别为25.8%、16.1% 和29.4%。研究表明中温复配污泥体系对木薯乙醇废液中的固体物质具有较好的降解效果。

摘要:为了强化透明质酸凝胶抗酶解能力，开发了初次交联-强化交联的偶联制备模式，并通过正交试验来确定最佳的交联条件。通过化学发光法测定透明质酸酶降解透明质酸凝胶后得到的产物，并由此计算凝胶的降解率。通过气相色谱法测定凝胶酸解后甘油含量并计算交联度。此外，检测了强化交联对透明质酸凝胶细胞毒性、遗传毒性以及溶血毒性的影响。结果表明，经过强化交联后（最优条件：35 ℃，0.05 mol/L NaOH，1.5 h，透明质酸单体/交联剂比例8∶1）。此后24、48、72 h降解率分别由初次交联后的9.76%、16.79%、20.45%到降低至强化交联后的6.85%、7.56%、12.4%；交联度由初次交联后的16.53%上升到强化交联后的54.52%。此外，强化交联后的凝胶在毒性检测中细胞毒性维持在1级，无明显致突变性，溶血度符合一般生物材料安全要求。

摘要:为制备食品级β-甘露聚糖酶，将来源于宇佐美曲霉（Aspergillus usamii） 的糖苷水解酶5家族β-甘露聚糖酶突变体基因（Auman5A^loop/H321G） 克隆至表达质粒pKLAC1信号肽?琢-MF下游，构建重组表达质粒pKLAC1-Auman5A^loop/H321G，并电转化乳酸克鲁维酵母（） GG799。采用半乳糖诱导表达和酶活性分析获得了高水平表达的重组β-甘露聚糖酶突变酶（reAuMan5A^loop/H321G） 的转化子GG799/Auman5A^loop/H321G，其产酶活力为54.9 U/mL。SDS-PAGE分析显示，reAuMan5A^loop/H321G的表观相对分子质量约为55 000。经YPG培养基初始pH、摇瓶装液量以及诱导剂的种类、初始质量浓度和添加方式的初步优化，GG799/Auman5A^loop/H321G所产酶活力较工艺优化前提高了254.6%，从而实现了reAuMan5A^loop/H321G在乳酸克鲁维酵母中的高效表达。

摘要:利用作者所在实验室团队自主研发的射频设备探究了射频处理对八角粉的杀菌效果。结果表明，随射频（27.12 MHz）处理时间的增加，样品的温度不断增大，微生物致死率也显著增加。射频处理八角粉7 min，在最大限度保证样品质量的条件下可使样品中的微生物降低1.74 lg CFU/g。但是，RF处理样品加热的非均匀性一直是制约射频技术发展的关键问题。利用4个装有相同质量八角粉（37 g）的聚乙烯塑料袋（140 mm×100 mm）对称重叠在一起组成的模型来研究射频加热的均匀性。研究结果表明，样品内部和中心的温度明显高于表面温度，RF处理结合间歇的翻转可显著提高射频加热的均匀性。射频技术是一种很有前景的低水分活度食品新型杀菌技术。

摘要:研究FOSB基因侧翼序列是否含有内部核糖体进入位点（internal ribosme entry site，IRES），进而探究其生理功能。作者利用双顺反子报告载体（pRL-FL），构建检测质粒（pRL-FOSB-FL），并将其转染到人胚肾细胞HEK293和4种癌细胞中，检测FOSB mRNA 5′非翻译区（5′untranslated region，5′UTR）IRES活性并通过逐步截断探索其活性中心，最后对肝癌细胞Bel-7402进行药物（紫杉醇和顺铂）刺激。报告载体的结果显示，FOSB mRNA 5′UTR具有IRES活性，且在不同细胞中FOSB IRES活性存在显著性差异，在卵巢癌细胞A2780/WT细胞中FOSB IRES活性较高。序列截断发现，FOSB mRNA 5′UTR中的160nt（-376到-217）对其IRES的功能至关重要.在肝癌细胞中，随着加药浓度的增加，其IRES活性逐渐增加，尤其在紫杉醇刺激下活性增加更为明显。本研究发现的FOSB基因的这些特性为研究FOSB在肿瘤的预防与治疗提供了一种新的思路。

摘要:从分离自蜂蜜的芽孢杆菌中筛选到一株高产β-半乳糖苷酶的菌株，鉴定为地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis），并命名为Bacillus licheniformis SYBC hb15。纯化该酶并研究其酶学性质，以邻硝基酚-β-D-半乳糖苷（ONPG）为底物，B. licheniformis SYBC hb15所产β-半乳糖苷酶的最适水解反应温度是60 ℃；70 ℃放置60 min后酶活力仍保留65%，具有较高的热稳定性；与嗜热菌Talaromyces thermophilus来源的β-半乳糖苷酶相比，葡萄糖对其水解活性的抑制较弱。因此，B. licheniformis SYBC hb15所产的β-半乳糖苷酶具有较高的热稳定性和葡萄糖耐受性，有很好的工业应用潜力。

摘要:含硫氨基酸是所有生物生长繁殖不可缺少的氨基酸。尽管毕赤酵母在工业发酵中作为重要的表达菌株，但是其含硫氨基酸的生物合成途径尚未明了。作者采用生物信息学及表型分析的方法，阐明了毕赤酵母含硫氨基酸的生物合成途径。结果表明，毕赤酵母可通过O-乙酰同丝氨酸及O-乙酰丝氨酸与无机硫元素合成含硫氨基酸，甲硫氨酸与半胱氨酸也可通过转硫途径实现相互转化。另外毕赤酵母cys3Δ突变菌株在未添加半胱氨酸的合成培养基中对硒代甲硫氨酸表现出显著的抗性。综上所述，未来有望应用毕赤酵母表达硒蛋白用于蛋白质三级结构的分析。

摘要:为改善米曲霉木聚糖酶AoXyn11A的温度特性，基于其三维结构的同源建模和分子动力学模拟，随机替换最高B-factor值位点处的Gly21。以重组表达质粒pET-28a-Aoxyn11A为模板，采用全质粒两步PCR技术对AoXyn11A基因（Aoxyn11A） 中编码Gly²¹的密码子实施饱和突变，将pET-28a-Aoxyn11A各突变体转化E. coli BL21（DE3），构建了突变转化子文库。以酶的热稳定性为指标，从文库中筛选出最优突变转化子（E. coli/Aoxyn11A^G21I）。DNA测序结果显示，E. coli/Aoxyn11A^G21I表达一种由Ile²¹替换了Gly²¹的突变酶AoXyn11A^G21I。温度特性分析表明：突变酶的最适温度由突变前的55 ℃提高至65 ℃；AoXyn11AG21I在55 ℃及以下稳定，较AoXyn11A提高了7 ℃。另外，AoXyn11A突变前后的pH特性改变不大。

摘要:内酯水解酶ZHD101对玉米赤霉烯酮降解效果显著，是目前研究最广泛的玉米赤霉烯酮降解酶，但由于热稳定性较低，无法满足饲料生产制粒过程中的温度要求。作者利用理性设计和分子改造在其分子中引入二硫键，以提高ZHD101的热稳定性。通过在分子引入七对半胱氨酸双突变（A110C/P196C、S136C/R189C、D143C/P181C、S147C/P181C、D199C/A202C、L200C/A231C、R204C/G205C）以形成潜在的二硫键，研究其对热稳定性的影响。结果表明，突变体S136C/R189C和D143C/P181C在50 ℃加热处理2 min后的残余活性高于野生型，其中突变体D143C/P181C的残余活性是野生型的2倍，且室温下活力损失小于10%。在此基础上设计四突变（S136C/D143C/P181C/R189C），热稳定性和活力并不优于双突变D143C/P181C。本研究结果为提高ZHD101在饲料工业上的应用潜力打下了基础。

摘要:为获得人胃乙醇脱氢酶δδ-ADH，根据GeneBank中δδ-ADH的基因序列合成目的基因ADH7，构建重组表达载体pET-32a（+）-ADH7，并转化大肠杆菌E.coli BL21（DE3）。获得的阳性转化子经异丙基硫化-β-D-半乳糖苷（IPTG）诱导表达，SDS-PAGE电泳结果显示，目的蛋白质以包涵体的形式得到大量表达。用1 mol/L尿素溶解包涵体获得有活性的粗酶液，经HisTrap^TM excel亲和层析柱纯化获得目的蛋白质，检测δδ-ADH酶活并对其基本酶学性质进行研究。结果显示，δδ-ADH的活性为2.085 U/mg，Km为28.43 mmol/L，Vmax为316.46 μmol/（L·min）。δδ-ADH的最适反应温度为40 ℃，在30~50 ℃范围内温浴60 min，相对酶活在47%以上；最适pH为9.0，将δδ-ADH在不同pH（pH 3.0~11.0）的广泛缓冲液中于25 ℃保温30 min，在pH 6.0~11.0范围内酶活较稳定。pH 5.0时，相对酶活剩余60%；在0、500、1 000、1 500 mmol/L乙醇中37 ℃温浴30 min，相对酶活分别为65.6%、51.1%、45.4%和44.4%。

摘要:研究了外源添加纳米零价铁（NZVI）对糖蜜乙醇废水厌氧处理的作用以及NZVI对厌氧微生物活性和厌氧消化效果的影响。向厌氧消化体系中分别添加0、0.025、0.05、0.10、0.25、0.50、2.50 g NZVI进行批次实验。结果表明，随着NZVI添加量的增加，糖蜜乙醇废水的厌氧处理效率先升高后降低。添加0.50 g NZVI实验组的COD降解率、产气率和气体中甲烷含量最高，分别为71.1%、310.9 mL/g COD和58%，比空白组提高14.7%、35.6 mL/g COD和18.8%；反应结束时该组COD和硫化物质量浓度最低，分别为2 400 mg/L和33.3 mg/L。NZVI添加量为2.5 g实验组SO4^2-去除效率和污泥胞外聚合物（EPS）含量最高，硫酸根最终质量浓度为288.2 mg/L，去除率为72.8%，是空白组的1.93倍；EPS中蛋白质和多糖质量分数分别为46.00 mg/gVSS和5.05 mg/gVSS，分别是空白实验组的4.43和1.66倍。脱氢酶活性在添加0.50 g NZVI的实验组中最高，为340.3 TF μg/（mL·h），比空白组提高192.5 TF μg/（mL·h）。

摘要:分析三文鱼片在冷藏过程中的微生物群落多样性及菌相变化，确定其优势腐败菌。以4 ℃冷藏条件下三文鱼片为研究对象，分别于第0、1、2、3、4天提取鱼片上的细菌总DNA，采用高通量测序技术分析细菌群落变化，确定其优势菌。结果表明，高通量测序分析共获得281个菌属，其中丰度大于1％的有6个，大于0.1％的有16个。在三文鱼冷藏过程中，其菌相不断变化，但其主要优势菌属保持不变，主要为假单胞菌属、发光杆菌属、希瓦氏菌属、不动杆菌属、黄杆菌属及金黄杆菌属，且随着储存时间的延长，假单胞菌属的丰度（优势性）逐渐增加。

摘要:探究饲喂高脂日粮对肥胖易感（obesity prone，OP）和肥胖抵抗（obesity resistant，OR）小鼠骨性能的影响及槲皮素在其中的干预作用。将小鼠随机分为正常日粮组（C）和高脂日粮组。7 w后，将高脂日粮组的小鼠按体质量分出OR组和OP组，并在OP组和OR组小鼠的高脂日粮中添加槲皮素进行干预，分别测定槲皮素添加前后各组小鼠的股骨性能参数、氧化还原状态以及成骨细胞和破骨细胞分化相关基因的表达。结果显示，高脂日粮显著降低OP和OR小鼠的骨性能，显著提高破骨细胞分化相关基因的表达，显著降低成骨细胞分化相关基因的表达，加入槲皮素后能得到恢复。与前面结果一致，高脂日粮显著降低OP和OR小鼠股骨的抗氧化指标以及相关基因的表达，显著升高股骨MDA质量摩尔浓度，加入槲皮素后均能得到恢复。因此高脂日粮导致肥胖易感和肥胖抵抗小鼠股骨氧化应激，可能影响成骨细胞和破骨细胞分化相关基因的表达降低骨性能，槲皮素可通过改善两种小鼠股骨的氧化还原状态提高骨性能。

摘要:为降低钝顶螺旋藻培养和采收成本，利用膜光生物反应器（MPBR）进行钝顶螺旋藻培养和预采收的条件研究实验。实验结果表明：当生物量达到1.8 g/L时可进行微藻采收；初始藻液质量浓度为1.828 g/L时，MPBR中最大体积浓缩系数为2，最佳稀释率为0.08 d^-1，藻产品质量浓度可达3.319 g/L；获得1 g微藻生物量，MPBR中可节约水、氮、磷的量分别为0.301 L、0.248 g、0.053 g。与传统光生物反应器（PBR）相比，MPBR能够降低微藻培养和采收的成本。

摘要:以杏鲍菇菌渣为原料，探讨了其固态发酵产漆酶的条件，并对粗酶液在染料脱色中的应用进行了初步探索。结果表明，当添加质量分数4% 甘蔗渣、质量分数1.2%硝酸铵、质量分数1.0%碱木素时，杏鲍菇菌渣产酶能力最强，达到386.9 U/gds。相对于杏鲍菇菌渣初始漆酶酶活18.6 U/gds，优化后提高了20倍以上。最适条件下，发酵粗酶液在无介体存在下对甲基红、活性艳蓝K3R、酸性蓝209、活性艳蓝KNR的脱色率分别达到85.8%、85.6%、68.3%、71.2%，在添加介体的条件下活性艳蓝K3R、酸性蓝209、活性艳蓝KNR的脱色率分别达到88.8%、93.4%、89.7%。显示出杏鲍菇菌渣漆酶良好的环保应用前景。

摘要:利用乙醇废水氧化塘出水培养校内湖泊淡水浮萍（青萍），确定了最适稀释倍数为10倍。149 g/m²（湿重）初始接种密度下获得了浮萍最大相对生长率（RGR）9.11%，以干重计的蛋白质质量分数为28.50%；不同接种密度浮萍对培养废水中总氮（TN）、总磷（TP）、氨氮（NH4+-N）和化学需氧量（COD）的去除效果相差不大，去除率分别为46%~49%、70%~79%、78%~82%和35%~38%。浮萍厌氧消化结果表明：其具有单独生产沼气的能力；将其与剩余污泥混合厌氧消化，通过底物互补的优势，缩短了产甲烷酸化期，提高了厌氧消化产气能力，其累积产气量实际值为2 963 mL，比计算值2 669 mL提高了11%；且混合厌氧消化提高了产生气体的甲烷纯度，由浮萍组的50.29%提高到混合组的56.93%.

摘要:为了比较悬浮填料和弹性填料的挂膜启动过程及抗冲击负荷能力，研究了接种河流底泥的两组生物膜反应器的挂膜速度以及不同水力停留时间下处理污染河水的效率。结果表明，悬挂弹性填料的生物膜反应器的NH4^{+ - N去除率比填充悬浮填料的生物膜反应器提前4 d挂膜成熟，挂膜成熟后两组反应器的NH4+-N和CODMn去除率均分别稳定在97%和80%以上；随着水力停留时间由14.80 h缩短至7.99 h，两组反应器NH4+-N平均去除率分别由98.18%、98.76% 降至78.32%、87.63%，CODMn平均去除率分别由84.52%、83.69%降至60.90%、64.71%；不同水力停留时间下弹性填料附着的生物膜具有更高的活性生物量，且生物膜镜检显示其生物膜结构更为致密；这说明，与悬浮填料相比，弹性填料在处理污染源水时能更快的实现挂膜启动并且具有较强的抗冲击负荷能力。}

摘要:利用多聚赖氨酸（poly-lysine）对同源二聚体肌酸酶进行化学修饰，研究该法对酶稳定性的影响。选用L9（34）正交试验方案，研究不同修饰条件对修饰酶的催化效率和热稳定性的影响，确定多聚赖氨酸修饰肌酸酶（CRE）的最佳条件为CRE-COOH与poly-lysine-NH2、EDC的摩尔比分别为1∶100和1∶10，pH为7.0。通过SDS-PAGE鉴定，探测多聚赖氨酸可在酶分子表面产生共价结合。修饰酶的催化动力学参数K/i<>m和kcat分别为4.75×10^-2 mol/L和2.50×10² S^-1。与游离酶相比，修饰酶的热稳定性和pH稳定性均明显提高。修饰酶比游离酶的Tm值高了2.07 ℃，当pH值为4.0和10.0时，修饰酶的酶活力仍保留在50%以上，而游离酶活性几乎丧失。进一步优化研究表明，多聚赖氨酸表面修饰法有可能成为有效提高肌酸酶稳定性的一种方法。