• 2015年第34卷第8期文章目次
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    • 促进微生物生产多不饱和脂肪酸的研究

      2015, 34(8):785-789. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2015.08.001

      摘要 (725) HTML (0) PDF 664.58 K (1050) 评论 (0) 收藏

      摘要:多不饱和脂肪酸(PUFAs)作为功能性油脂已被广泛应用于食品工业领域。随着对纯PUFAs脂质的需求量越来越多,来自于动植物和深海洋鱼的PUFAs远远不能满足市场需求,且动植物含油量及不饱和脂肪酸类型、比例均受到一定的限制。一系列的研究表明,微生物特别是藻类、真菌能合成几乎所有的PUFAs,并能在工业规模上培育有开发价值的可替代生物资源。作者在近年来国内外有关研究的基础上,从培养条件、菌种选育、基因工程、代谢调控等方面对促进微生物产PUFAs的研究进行了综述,为相关的研究提供参考。

    • 小分子靶标核酸适配体研究进展

      2015, 34(8):790-798. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2015.08.002

      摘要 (1010) HTML (0) PDF 1002.07 K (1204) 评论 (0) 收藏

      摘要:核酸适配体是能够与靶分子高亲和力、高特异性结合的单链寡核苷酸。目前,在生物传感、疾病诊断和治疗等方面,以核酸适配体作为分子识别元件已经开发了许多具有应用可行性的各种检测方法。尽管核酸适配体具有这些方面的应用可能性,但是目前能够结合小分子的核酸适配体非常少。小分子具有多种多样的生物功能以及临床、商业价值,因此针对小分子靶标展开研究,开发新型、实用的分子识别探针用于检测这些小分子具有重要的研究意义。作者主要介绍了针对小分子靶标核酸适配体开发所面临的技术挑战,以及在生物传感和食品安全应用方面所存在的机遇。

    • 重组大肠杆菌产Bacillus subtilis 168来源γ-谷氨酰转肽酶的摇瓶发酵优化

      2015, 34(8):799-805. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2015.08.003

      摘要 (456) HTML (0) PDF 860.80 K (1434) 评论 (0) 收藏

      摘要:为实现来源于Bacillus subtilis的γ-谷氨酰转肽酶(GGT)高效胞外分泌表达,以基因工程菌E.coli BL21(DE3)/pET-20b(+)/ggt为出发菌株,对其发酵产酶的诱导条件和培养基进行优化。最终确定其最优发酵培养基为:10 g/L甘油,21 g/L酵母粉,7 g/L蛋白胨,130 mmol/L磷酸盐;发酵条件为:37 ℃、200 r/min培养4 h,加入0.2 mmol/L IPTG后转入25 ℃,诱导40~48 h,优化后酶活达到81.2 U/mL,是未优化前的1.9倍。本研究结果为目前国内报道大肠杆菌摇瓶发酵产γ-谷氨酰转肽酶的最高酶活,为该酶的工业化生产奠定了基础。

    • 蛹虫草Cordyceps militaris JN168菌株的诱变育种及液态发酵产虫草素

      2015, 34(8):806-813. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2015.08.004

      摘要 (680) HTML (0) PDF 2.13 M (1461) 评论 (0) 收藏

      摘要:利用离子束、亚硝基胍及离子束-亚硝基胍诱变法处理蛹虫草Cordyceps militaris JN168,初步获得了几株较高产虫草素的菌株。通过进一步筛选得到复合诱变菌2,并对该菌的液态发酵培养基组分进行了优化。实验结果表明:蛹虫草液态发酵产虫草素的最佳培养基组分为(g/L),葡萄糖40,酵母浸粉25,MgSO4·7H2O 0.6,K2HPO4·3H2O 0.6,KH2PO4 0.6。优化后虫草素产量提高了5倍,最高达1 045.65 mg/L。

    • 酱香白酒酿造环境曲霉的分离及Aspergillus hennebergii酶分泌胁迫条件

      2015, 34(8):814-821. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2015.08.005

      摘要 (422) HTML (0) PDF 1.35 M (969) 评论 (0) 收藏

      摘要:以茅台镇酱香白酒酿造过程关键环节样品为载体,对曲霉的生态结构分布进行分析;以新鲜麸皮为培养基模拟固态发酵方法对影响筛选优势菌株Aspergillums henneberguii的生长及分泌糖化酶、蛋白酶的主要发酵胁迫条件进行了分析。结果分离得到曲霉103株,分别鉴定为10个种属种,即A.niger、A.oryzae、A.terreus、A.tubingensis、A.flavus、A.henneberguii、A.fumigatus、A.niveus、A.candidus和Monascus;发酵基质初始水分在50 %和初始pH在3.5~4.0条件下有利于Aspergillums henneberguii的生长和酶的分泌;Aspergillums henneberguii的适宜生长温度范围为30~35 ℃,酶分泌温度为32~35 ℃;高乙醇体积质量(>8%)对Aspergillums henneberguii的生长和产酶存在抑制,低乙醇体积质量(2%)反而有利于其生长和酶的分泌;(NH4)2SO4有利于Aspergillums henneberguii糖化酶的分泌,NaNO2和酵母浸膏有利于其生长和蛋白酶的分泌;乳糖和麦芽糖对Aspergillums henneberguii的生长和产酶有利,山梨糖、蔗糖、果糖可促进菌株糖化酶的分泌;单独添加硫酸钠有利于Aspergillums henneberguii的生长和酶的分泌;新鲜麸皮富含碳源、氮源、无机盐、微量元素等,为Aspergillums henneberguii菌体生产及制酶的优质天然载体。Aspergillums henneberguii的应用可满足传统固态白酒酿造过程的双边发酵和风味形成机制需求。

    • 两种干燥方式对麦绿素粉品质的影响

      2015, 34(8):822-827. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2015.08.006

      摘要 (451) HTML (0) PDF 958.65 K (1597) 评论 (0) 收藏

      摘要:以冷冻的嫩大麦苗为原料,研究真空冷冻干燥和喷雾干燥对麦绿素粉的溶解性、堆积密度、平均粒径、色差和关键组分叶绿素、黄酮、SOD酶活性及抗氧化性的影响。结果发现:在物理特性方面,喷雾干燥的麦绿素粉溶解性较好、堆积密度较大、平均粒径较小、色泽较暗;在关键组分方面,喷雾干燥的麦绿素粉的叶绿素含量、黄酮含量、SOD酶活性分别是真空冻干麦绿素粉的56.7%、68.1%、47.9%;抗氧化性方面,真空冷冻干燥的麦绿素粉还原力和清除DPPH自由基的能力均大于喷雾干燥粉。因此,要得到粒径小、溶解性好的麦绿素粉适宜选择喷雾干燥,若要得到营养价值高、色泽好的麦绿素粉适宜选择真空冷冻干燥。

    • 泡菜发酵专用短乳杆菌的高密度培养

      2015, 34(8):828-834. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2015.08.007

      摘要 (415) HTML (0) PDF 1.09 M (870) 评论 (0) 收藏

      摘要:为了实现泡菜发酵专用短乳杆菌H3的高密度细胞培养,考察了培养基成分、培养条件、中和剂以及补料策略对菌体活菌数的影响。结果表明:菌体适宜培养基配方为葡萄糖25 g/L,酵母粉15 g/L,柠檬酸1.53 g/L,柠檬酸钠18.58 g/L,VB6 20 mg/L,MgSO4·7H2O 0.58 g/L,MnSO4·5H2O 0.25 g/L,Tween-80 1 g/L,在培养过程中使用20%柠檬酸钠调节培养液pH值6.8~6.3、培养温度30 ℃、装液量40 mL/250 mL三角瓶,适宜补料培养方式为培养10 h和20 h时各补加4%的碳氮源(碳氮比为5∶3)。培养结束时培养液中短乳杆菌活菌数可达1.27×1010 CFU/mL,为未优化前的7.5倍,是目前已报道的最高活菌数水平,为实现泡菜发酵专用的短乳杆菌发酵剂的工业化生产奠定基础。

    • 聚乙烯醇降解菌的筛选与降解条件优化

      2015, 34(8):835-841. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2015.08.008

      摘要 (375) HTML (0) PDF 1.38 M (949) 评论 (0) 收藏

      摘要:为了实现纺织工业废水中PVA1799的生物降解,从纺织印染厂区筛选到一个能快速降解培养基中PVA1799的混合菌系,命名为SH-TD。从中分离出3株纯培养菌株,分别命名鉴定为SH1 (Aeromonas sp.),TD5 (Pseudomonas sp.),TD33 (Acinetobacter sp.)。通过对含PVA1799出发培养基进行单因素及Placckett-Burman实验筛选出三个对PVA1799降解有显著影响的因素分别为Yeast-Extract、(NH4)2HPO4、CaCl2·2H2O。然后进行最陡爬坡实验逼近最佳响应面区域,最后通过Box-Behnken设计,利用Design-Expert软件进行回归分析,得到各因素的最佳质量浓度组成为(g/L):Yeast-Extract 0.04、(NH4)2HPO4 48.42、BaCl2 0.06。在最优条件下,24 h PVA降解率从原先的30%提高到80%。

    • 高渗工业菌株Candida glycerinogenes整合型表达载体的构建及验证

      2015, 34(8):842-848. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2015.08.009

      摘要 (587) HTML (0) PDF 1.10 M (885) 评论 (0) 收藏

      摘要:构建应用于工业用产甘油假丝酵母(Candida glycerinogenes) CGMCC NO. 6830的整合型表达载体,建立一种可利用底物形成的渗透压调控表达外源基因的体系。以pUC19质粒为基本骨架,C. glycerinogenes CGMCC NO. 6830的18S rDNA为整合位点,运用其3-磷酸甘油脱氢酶基因启动子PCggpd启动外源基因表达,腐草霉素抗性基因ble作为重组酵母转化子筛选标记,获得应用于产甘油假丝酵母的稳定的表达型整合载体;以绿色荧光蛋白基因gfp作为报告基因考察该表达质粒的性能,实现了外源基因gfp的渗透压调控表达。

    • 低温驯化速度对鲫鱼离水储藏酶活性的影响

      2015, 34(8):849-855. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2015.08.010

      摘要 (359) HTML (0) PDF 883.42 K (1426) 评论 (0) 收藏

      摘要:为研究低温驯化及储藏温度对鲫鱼活体离水后储藏的影响,成年鲫鱼(Carassius carassius) 放置于水箱中,采用每小时 5 ℃和1 ℃速率,由25 ℃匀速降温降至0 ℃,分别在4 ℃和0 ℃冷库中离水储藏24 h,测定鲫鱼新陈代谢及抗氧化相关酶的活力,并探讨低温驯化及离水储藏对鱼体生理状态的影响。结果表明,1 ℃/h降温有利于乳酸脱氢酶(LDH)活力的保存。经过1 ℃/h降温驯化后,0 ℃储藏异柠檬酸脱氢酶活力功能得到了一定保存,脑琥珀酸脱氢酶(SDH)未受影响。丙氨酸氨基转移酶(ALT)活力体现为受储藏温度影响,0 ℃下其活力得到保存。0 ℃储藏导致丙二醛(MDA)的积聚,同时低温储藏中血液过氧化氢酶(CAT)集聚而肝脏未表现出明显变化。

    • 大肠杆菌araE基因对典型苯丙素类化合物转运过程的影响

      2015, 34(8):856-863. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2015.08.011

      摘要 (484) HTML (0) PDF 1.33 M (1532) 评论 (0) 收藏

      摘要:为了研究阿拉伯糖转运蛋白对大肠杆菌转运典型苯丙类素化合物的能力,采用基因过量表达和基因沉默技术,实现对蛋白质表达量进行控制,从而研究AraE对苯丙类素化合物的转运过程机制。同时,用定量PCR技术在转录水平考察并验证了araE基因的过量表达水平和基因抑制程度。通过测定菌体的生长动力学参数,衡量菌体对典型苯丙素类化合物的转运能力。结果表明,大肠杆菌araE基因只参与了大肠杆菌对白藜芦醇的转运,对其他种类的苯丙素类化合物作用不明显。

    • 重组枯草芽孢杆菌高产氨肽酶策略与提取工艺优化

      2015, 34(8):864-873. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2015.08.012

      摘要 (365) HTML (0) PDF 1.40 M (1479) 评论 (0) 收藏

      摘要:研究不同的产酶促进剂(渗透压调节剂、表面活性剂、有机酸盐)对重组枯草芽孢杆菌产氨肽酶的影响,并对氨肽酶的提取工艺进行优化。获得产酶促进剂优化组合为:氯化钾0.1 mol/L、吐温802.4 μL/mL、L-谷氨酸钠0.6%、酒石酸钾0.7%;优化培养条件为:装液量60 mL/250 mL、初始pH 7.5、接种体积分数5%、转速220 r/min、培养时间36 h。在上述优化条件下,该重组菌株产氨肽酶酶活达232.5 U/mL,是优化前的3.32倍。该重组氨肽酶发酵液经低速离心、双水相萃取、超滤浓缩提取后,回收率达67.23%,纯化倍数为8.29。

    • 番茄、青椒混储过程的硅窗气调保鲜

      2015, 34(8):873-878. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2015.08.013

      摘要 (508) HTML (0) PDF 966.28 K (713) 评论 (0) 收藏

      摘要:以粉红熟番茄、青椒为试材,采用硅窗气调、减压储藏和冷藏3种保鲜方式,研究硅窗气调对番茄、青椒混储生理生化品质的影响。结果表明:硅窗气调贮藏有利于番茄、青椒混储品质的保持,失重率的变化、色泽的变化、VC的降解、可滴定酸和可溶性固形物下降及膜脂过氧化产物丙二醛(MDA)的积累,均较其他两种贮藏方式缓慢;硅窗气调有利于番茄、青椒混储期品质的保持,延长其储藏期。

    • 土生拉乌尔菌Y20产乳糖氧化酶发酵条件优化

      2015, 34(8):879-885. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2015.08.014

      摘要 (428) HTML (0) PDF 2.28 M (711) 评论 (0) 收藏

      摘要:以选育的土生拉乌尔菌(Y20)为生产菌株,在单因素和响应面分析的基础上考察了不同发酵条件对乳糖氧化酶活性的影响。方差分析结果表明,发酵条件对乳糖氧化酶活性影响次序:初始pH>发酵时间>接种体积分数>发酵温度。响应面分析优化的最适发酵条件:发酵时间25 h,发酵温度28 ℃,初始pH 7.2,接种体积分数2%。最优发酵条件下乳糖氧化酶的实际酶活可达78.36 U/g,与预测的酶活78.85 U/g接近。

    • 玉米黄素糖基化酶在大肠杆菌中的表达与纯化

      2015, 34(8):886-890. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2015.08.015

      摘要 (821) HTML (0) PDF 832.31 K (1434) 评论 (0) 收藏

      摘要:噬夏孢欧文氏菌合成类胡萝卜素涉及的一系列反应都是在相关酶的催化下完成的,其中催化玉米黄素转化为玉米黄素二葡萄糖苷的玉米黄素糖基化酶由基因crtX编码。PCR扩增出噬夏孢欧文氏菌crtX基因,构建重组质粒,转化大肠杆菌。经镍离子树脂亲和层析、DEAE-Sepharose FF离子交换层析纯化,得到了电泳纯的重组噬夏孢欧文氏菌玉米黄素糖基化酶,该重组蛋白在体外具有催化玉米黄素转化为玉米黄素二葡萄糖苷的活性。

    • 肠炎沙门氏菌gDNA标准物质的研究

      2015, 34(8):891-896. DOI: 10.3969/j.issn.1673-1689.2015.08.016

      摘要 (394) HTML (0) PDF 1.06 M (826) 评论 (0) 收藏

      摘要:摘要: 作者对制备肠炎沙门氏菌核酸标准物质(gDNA)进行初探,共制备200支样品,每支约含有肠炎沙门氏菌gDNA 1 μg。方差分析结果显示,F值为0.835 7,小于F0.05(14,30)=1.68,表明在95%显著性水平时,样品的gDNA含量均匀;稳定性试验表明样品在-20 ℃下保存12个月,gDNA含量维持在1 μg/支,0.8 g/dL的琼脂糖凝胶电泳的目标条带清晰,以invA基因为引物的PCR反应产物电泳条带清晰,样品均具有较好的稳定性。

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